Evaluaci贸n de diferentes medios l铆quidos para el cultivo de Gardnerella vaginalis y caracterizaci贸n del perfil de prote铆na por electroforesis PAGE-SDS

[摘要] Se evaluaron 3 medios de cultivo líquidos caldo triptosa soya suplementado con suero equino (CTS-se) / sin suplemento (CTS) y caldo Casman (CC) en diferentes condiciones de incubación: 10 % de CO2 y en condiciones aerobias. No hubo diferencias significativas en los valores de densidad óptica para los medios CTS-se y CC. Sin embargo, al establecer el perfil de proteínas por PAGE- SDS para las condiciones evaluadas, la presencia de la proteína de 14 kDa y los valores de densidad óptica permitieron la selección del medio CC para el cultivo de Gardnerella vaginalis. Se estudió la sensibilidad a diferentes pH en este medio, resultó óptimo el pH 7,2 y se estableció la cinética de crecimiento. El análisis por PAGE-SDS de las células completas correspondientes a diferentes aislamientos clínicos de G. vaginalis con variaciones bioquímicas permitió caracterizar el perfil de proteínas en este medio y mostró similitud entre los aislados. DeCS: GARDENELLA VAGINALIS/ crecimiento & desarrollo; VAGINOSIS BACTERIANA; MEDIOS DE CULTIVO; ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA.La vaginosis bacteriana (VB) es una infección vaginal molesta que se presenta en mujeres en edad reproductiva. Se caracteriza por una descarga homogénea blanquecina con fetidez.1-3 La VB tiene lugar cuando se altera el ecosistema vaginal por la acción de antibióticos, hormonas, estrés y enfermedades de transmisión sexual; lo cual conduce a un reemplazo de los Lactobacillus sp predominantes en la flora vaginal por Gardnerella vaginalis en asociación con otras bacterias anaerobias: Bacteroides sp, Prevotella sp, Mobiluncus sp y Peptostreptococcus sp.4-6 G. vaginalis se ha considerado el principal agente, pues presenta varios factores que facilitan su patogenicidad, una glicoproteína de 120 kDa que posee una elevada afinidad por la lactoferrina humana7,8 y una citolisina que actúa sobre las células del amnios.9, 10La mayor cantidad de formulaciones reportadas en la literatura para el cultivo de G. vaginalis se refieren a medios sólidos. A pesar de la importancia de estos medios como herramientas para el diagnóstico de enfermedades infecciosas, aún no se han esclarecido totalmente las leyes que rigen el crecimiento de los microorganismos en las colonias. En cambio, este aspecto ha sido abordado en los cultivos líquidos donde además es posible conocer la cinética de crecimiento, cuestiones relacionadas con el metabolismo del microor-ganismo y obtener altos rendimientos de biomasa celular.11 Sin embargo, para G. vaginalis existen pocas formulaciones, la mayoría utilizan como suplemento sangre humana y 10 % de CO2.12-15En la identificación de G. vaginalis se ha descrito un número importante de variaciones fenotípicas.2,3 Piot y otros en 1984 desarrollaron un sistema de tipificación estableciendo 8 biotipos diferentes.16 Benito y otros utilizaron un sistema de tipificación modificado que incorpora la fermentación de azúcares y encontraron 17 biotipos diferentes.17 También se han utilizado las técnicas moleculares como el análisis de restricción del ADN ribosomal amplificado (ARDRA), disponible en el reconocimiento de al menos 3-4 genotipos diferentes de G. vaginalis.18 Los análisis de proteínas por electroforesis en geles de poliacrilamida PAGE- SDS también constituyen una herramienta en los sistemas de tipificación para microorganismos, en los cuales se observan variaciones como es el caso de G. vaginalis.19 Sin embargo, en la literatura sobre la temática no se han encontrado trabajos relacionados con los perfiles de proteínas caracterizados para diferentes aislamientos de este género, los cuales serían de utilidad fundamentalmente para el estudio de proteínas expuestas de superficie, que podrían constituir blancos de la respuesta inmune.Los autores de este trabajo se propusieron como objetivo evaluar diferentes medios líquidos para la multiplicación de G. vaginalis de modo reproducible, definir el pH óptimo en el medio seleccionado, establecer la cinética de crecimiento en estas condiciones y caracterizar el perfil de proteínas por electroforesis en geles de poliacrilamida de G. vaginalis en el medio de cultivo seleccionado, así como conocer el comportamiento en este de diferentes aislamientos de G. vaginalis.Mé

[学科分类] 传染病学