Inmunizaci贸n con subgenoteca de Leishmania amazonensis protege contra el reto a ratones BALB/c

[摘要] Se construyó una genoteca de Leishmania amazonensis en vector de expresión en células eucariotas (pEF1HisA, pEF1HisB, pEF1HisC). Se prepararon 2 subgenotecas con un número aproximado de 500 clones cada una y ratones BALB/c fueron inmunizados con 50 mg/0,1 mL de ADN de cada una; 2 inmunizaciones por vía IM, con 15 d de intervalo fueron realizadas. Grupos de ratones controles fueron inmunizados con ADN del plásmido vacío, con antígeno soluble del parásito (100 mg/0,1 mL) y solución salina fisiológica. Se midió el tamaño de las lesiones durante 12 semanas y al final del experimento, la carga parasitaria en los sitios de lesión fue determinada por el método de microtitulación en placas. Los ratones inmunizados con ADN 1, controlaron el tamaño de las lesiones, así como también los inmunizados con antígenos solubles, lo que alcanzó diferencia estadística (p< 0,05) en relación con el resto de los grupos, cuyas lesiones aumentaron de manera creciente. La carga de parásitos encontrada en los sitios de lesión corroboró los resultados anteriores, encontrando un número de promastigotes significativamente menor en aquellos que habían sido protegidos. Se concluyó que en la subgenoteca ADN1 deben existir genes, o fragmentos de genes, cuya expresión in vivo resulta protectora contra el reto, en el modelo murino empleado.Palabras clave: Genoteca, genes, Leishmania amazonensis, ratones BALB/c, vacuna de ácidos nucleicos, inmunización con ADN.   Los protozoos del género Leishmania constituyen parásitos intracelulares obligados de los macrófagos y otras células mononucleadas del hospedero vertebrado. Estos causan un grupo de enfermedades en el hombre y los animales que van desde lesiones cutáneas simples de cura espontánea, hasta la diseminación visceral severa, que generalmente causa la muerte.1Las leishmaniosis están ampliamente distribuidas en numerosas regiones geográficas de América, Asia, África y el sur de Europa. Diversos procedimientos han sido empleados en la búsqueda de protección contra algunas de sus formas clínicas,2 incluida la reciente tecnología de inmunización con ácidos nucleicos,3 sin que hasta el momento exista alguno completamente efectivo . Se ha realizado la vacunación de ratones con ADN codificante para algunos antígenos de Leishmania, que incluyen la gp63,3 LACK,4 PSA-2,5 reportándose diferentes grados de protección, pero cada vez se hace más evidente la necesidad de utilizar más de un antígeno, o la acción cooperada de varios, para lograr una protección eficaz. Ejemplo de esto lo constituyen los resultados reportados por Dumonteil y otros,6 donde ratones inmunizados con plásmidos codificantes para los antígenos GP46, GP63 y CPb, mostraron estar mejor protegidos contra el reto con L. mexicana cuando fueron inmunizados con el conjunto de estos, que con los plásmidos individualmente. De igual forma, la vacunación con un cóctel de plásmidos que contenía los genes que codifican para las cisteíno proteinasas (CP) A y B de Leishmania, de reconocida acción protectora, evidenció un incremento en la respuesta inmune celular y humoral específicas, cuando se compara con la inmunización con el ADN de las CP, administrados individualmente.7 Utilizando como inmunógeno ADN total de una genoteca de Lm. amazonensis construida en vector pcDNA3, se obtuvo previamente un control significativo y transitorio de las lesiones causadas en ratones susceptibles por parásitos infectivos,8 lo cual demostró que este acercamiento es aún explorable en la búsqueda de alternativas para la protección contra esta parasitosis. La utilización de grupos más pequeños de genes, de talla conocida, o fragmentos de estos, pudiera acercar a la identificación futura de potenciales inmunógenos.Siguiendo aproximaciones enómicas, actualmente en boga, 2 trabajos, publicados recientemente, han demostrado que la utilización de genotecas de Leishmania y administradas como vacunas genéticas pueden en sí mismas constituir sistemas de protección9 o ser una aproximación interesante para identificar nuevas moléculas del parásito con capacidad de inducir inmunoprotección en el hospedero.10Basados en estos trabajos, los autores de este estudio se propusieron inmunizar ratones BALB/c con ADN de subgenotecas de Leishmania amazonenzis y estudiar su efecto protector contra el reto de promastigotes infectivos de la misma especie de parásito.Mé

[学科分类] 传染病学