Obtenci贸n de antisueros espec铆ficos para la serotipificaci贸n de Cryptococcus neoformans var: neoformans

[摘要] Se propuso la obtención de antisueros en el Laboratorio de Micología del Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kourí”, que permitiera la rápida identificación de las variedades y serotipos de Cryptococcus neoformans, dada la importancia clínico-epidemiológica que reviste su conocimiento. Mediante la inmunización de conejos con células enteras formalinizadas de los 4 serotipos de esta levadura, se obtuvieron antisueros que fueron adsorbidos con células de los serotipos heterólogos; lográndose 3 antisueros capaces de diferenciar a la var. neoformans (anti AD) y a sus respectivos serotipos (anti-A y anti-D). Este trabajo contribuirá al conocimiento de la epidemiología de esta importante enfermedad en el medio cubano, por ser la primera vez en Cuba que se logra la obtención de antisueros útiles para la identificación de los serotipos pertenecientes a la variedad neoformans, principal agente causal de la criptococosis. Palabras clave: Cryptococcus neoformans, criptococosis, epidemiología, sueros inmunes.   Atendiendo a la cantidad de manosa y la extensión de la O-acetilación así como otras propiedades bioquímicas de la cápsula polisacarídica, las cepas de Cryptococcus neoformans pueden ser agrupadas en 2 variedades y estas a su vez en serotipos: C. neoformans var. neoformans (serotipos A y D) y C. neoformans var. gattii (serotipos B y C).1,2 Se han descrito diferentes métodos de serotipificación entre los cuales se destaca Crypto Check Iatron desarrollado por Ikeda y otros en 1982 basado en la técnica de aglutinación en lámina.3 Estudios realizados previamente en el laboratorio del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kourí" utilizando medios de cultivo como el L-canavanina-glicina-azul de bromotimol, han demostrado la prevalencia de la variedad neoformans en Cuba;4 no obstante, solo se ha podido llevar a cabo la serotipificación de cepas procedentes de aislamientos clínicos.5Dado el incremento de la criptococosis en las últimas décadas y la importancia que reviste la identificación de los serotipos en el conocimiento de la posible fuente de infección, los autores se propusieron el desarrollo de un método rápido que permitiera su identificación en el laboratorio. Para la obtención de antisueros específicos se siguió la metodología descrita por Illnait y otros.6 Las suspensiones antigénicas fueron preparadas con células enteras formalinizadas a partir de cepas ampliamente estudiadas y caracterizadas en el laboratorio (LMIPK 030 serotipo A, LMIPK 0188 serotipo D, LMIPK 0186 serotipo B y LMIPK 036 serotipo C. Se emplearon conejos de la raza Nueva Zelandia de 3 kg de peso procedentes del Centro Nacional para la Producción de Animales de Laboratorio, Cuba. Los sueros obtenidos fueron titulados mediante aglutinación en lámina utilizando cepas homólogas. Para determinar el grado de reacción cruzada con otros serotipos se procedió de igual manera pero con serotipos heterólogos (fig.). Fig. Título de aglutinación de los antisueros obtenidos con las cepas homólogas y heterólogas. Todos los antisueros obtenidos mostraron reacción cruzada con las cepas heterólogas. Estas fueron más evidentes entre los serotipos A y D, posiblemente originadas por la similitud estructural de ambas cápsulas.7 Por su parte el antisuero antiserotipo C manifestó fuerte reacción con los restantes serotipos, lo que pudiera relacionarse con la mayor complejidad en la estructura de su envoltura (fig.).7 Trabajos realizados por Gade y otros7 y Murphy8 demostraron que los serotipos A y D son inmunológicamente más activos, resultados que se repiten en este trabajo. En el caso de los conejos inmunizados con la cepa LMIPK 0186 (serotipo B) no se logró respuesta de anticuerpos evidente; lo que pudiera haber estado sujeto a la capacidad de respuesta individual de los animales inmunizados o a la pobre inmunogenicidad de la cepa empleada. Las reacciones cruzadas fueron eliminadas mediante adsorción5 y dilución seriada de los sueros.9 Después de aplicados estos procedimientos, los niveles de anticuerpos resultantes en el antisuero anti-036 (serotipo C), no fueron suficientes para su uso en la caracterización serológica (datos no mostrados).Finalmente fueron obtenidos 3 antisueros capaces de reconocer a la variedad neoformans: anti AD, anti-A y anti-D, los cuales fueron enfrentados a cepas controles previamente caracterizadas, demostrándose su confiabilidad (tabla).   Tabla. Caracterización serológica de las cepas de C. neoformans y especies relacionadas            Cepas Antisueros Resultados Anti AD Anti D Anti A C. neoformans LMIPK 030 (A) (+) (-) (+) A C. neoformans 235 (A) (+) (-) (+) A C. neoformans LMIPK 0100 (A) (+) (-) (+) A C. neoformans LMIPK 0193 (A) (+) (-) (+) A C. neoformans LMIPK 0135 (B) (-) (-) (-) no aglutinó C. neoformans LMIPK 0186 (B) (-) (-) (-) no aglutinó C. neoformans LMIPK 024 (B) (-) (-) (-) no aglutinó C. neoformans LMIPK 036 (C) (-) (-) (-) no aglutinó C. neoformans LMIPK 025 (C) (-) (-) (-) no aglutinó C. neoformans LMIPK 026 (D) (+) (+) (-) D C. neoformans LMIPK 0188 (D) (+) (+) (-) D Candida albicans(-) (-) (-) no conocidoPor causa de que los estudios hasta el momento realizados tanto con muestras clínicas como ambientales en la región, y muy especialmente en Cuba, han demostrado el predominio del serotipo A, y a la difícil disponibilidad de los reactivos comerciales para la serotipificación de las cepas de C. neoformans, es de considerar como un gran paso de avance la obtención de antisueros que permitan un mejor conocimiento de la criptococosis en Cuba.

[学科分类] 传染病学