Validaci贸n de un ELISA para la cuantificaci贸n de IgG humana antiprote铆na de Neisseria meningitidis serogrupo B

[摘要] Se optimizó un ELISA de tipo indirecto en el cual se usan como antígenos de captura las proteínas de membrana externa del meningococo B presentes en la vacuna cubana VA-MENGOC-BC®. La presencia de anticuerpos específicos en muestras de sueros extraídas de individuos vacunados fueron detectadas con un conjugado anti-IgG humana: fosfatasa alcalina, revelándose la reacción con el sustrato específico p-nitrofenilfosfato. Se obtuvo el suero estándar a partir de un estándar de referencia, el rango de la curva de calibración es de 625 a 20 000 U/mL. Se seleccionó el suero control en la zona de mayor interés para las muestras y se determinaron las características del ensayo, cuya imprecisión intraensayo, interensayo y total fueron inferiores al 10 % en la zona más lineal de la curva. La detectabilidad fue de 700 U/mL. Los estudios de recuperación, paralelismo y linealidad muestran una inexactitud inferior al 10 %.Descriptores DeCS: NEISSERIA MENINGITIDIS; MENINGITIS MENINGOCOCICA/diag/ inmunol/terap; TEST DE ELISA/métodos; VACUNAS.La infección por Neisseria meningitidis es una condición peligrosa para la vida, que puede tener varias formas clínicas de presentación.1 La meningitis meningocócica tiene aún una significativa mortalidad y morbilidad al margen del sustancial progreso en el diagnóstico y tratamiento. La inmunización activa es la única y real solución para reducir la incidencia de estas infecciones por un largo período.2 Debido a la situación epidémica en Cuba en el año 1982, se inició un intenso programa dirigido a investigar y desarrollar una vacuna eficaz para prevenir la enfermedad meningocócica producida por el meningococo B, que culminó en 1989 con los estudios de eficacia de VA-MENGOC-BC.3-5 Después de la evaluación y aprobación, la vacuna ha sido aplicada en campañas de vacunación en Cuba y otros países y se reconoce como la primera vacuna eficaz en la prevención de la enfermedad meningocócica causada por el serogrupo B.6-8 En el Instituto "Finlay", además de producirse la vacuna antimeningocócica BC se desarrollan investigaciones de forma sistemática sobre este microorganismo para profundizar en el conocimiento de esta bacteria, así como evaluar de forma permanente el comportamiento de esta infección en nuestro país y en otros del área que se puedan beneficiar con el empleo de nuestra vacuna. Se han realizado varias investigaciones dirigidas a evaluar la inmunogenicidad de las proteínas vacunales, centrando la atención en análisis de seroconversión8,9 y en general para la evaluación de la eficacia de la vacuna cubana.En el presente trabajo se optimiza un ELISA de tipo indirecto para la cuantificación de anticuerpos isotipo IgG antiproteínas de membrana externa del meningococo B en suero de individuos vacunados. Se analizan algunas características del ensayo como la concentración óptima de recubrimiento, la imprecisión intra, interensayo y total, la detectabilidad y se evaluaron la curva estándar y la exactitud mediante pruebas de paralelismo, linealidad y recuperación y se determinó el rango del suero control.MÉ

[学科分类] 传染病学