Identificaci贸n de una proteasa neutra en intestino de Boophilus microplus por electroforesis en geles de poliacrilamida copolimerizados con gelatina

[摘要] Se realizó la identificación de una actividad neutra en intestino de Boophilus microplus por electroforesis en geles de poliacrilamida copolimerizados con gelatina, y el máximo de actividad se obtuvo a pH 6,0. Con el sustrato caseína, se obtuvo la mayor actividad específica a ese pH. La desaparición de esta actividad fue demostrada para ambos sustratos después de la adición de fluoruro de fenil metil sulfonilo en las mezclas de reacción. Resulta muy interesante encontrar una actividad endopeptidasa con estas características en el intestino, a pesar de que la actividad digestiva en garrapatas es intracelular a pH muy ácido, a diferencia de los insectos.Descriptores DeCS: ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA/métodos; GARRAPATAS/enzimología; PEPTIDO PEPTIDO-HIDROLASAS/análisis; INTESTINOS.Boophilus microplus es un ectoparásito del ganado, vector de hemoparásitos como Babesia sp. y Anaplasma sp., que causa pérdidas económicas significativas en áreas tropicales y subtropicales.El intestino en garrapatas, es el sitio donde tiene lugar el proceso de digestión, de donde se obtienen la masa y la energía necesarias para la realización de múltiples procesos fisiológicos.1 Los estudios realizados en Rhiphicephalus sanguineus y Dermacentor variabilis han demostrado que el estómago es uno de los sitios de síntesis de vitelogenina,2,3 la que es transportada al ovario vía hemolinfa y convertida en vitelina, constituyente del huevo; además de constituir una vía de penetración de microorganismos al interior de la garrapata.4En 1983, Raikhel5 planteó que las garrapatas ixódidas se caracterizan por una combinación de 3 tipos de digestión: externa, del lumen intra-intestinal, e intracelular. La fase digestiva externa ocurre mediante el efecto lítico de la saliva; la segunda o intraluminal se limita a una lisis más completa de las células sanguíneas a través de las secreciones de células secretoras; la intracelular ocurre en las células digestivas especializadas y tiene un papel dominante, ya que los componentes sanguíneos sufren hidrólisis completa.Sin embargo, diferentes autores están en desacuerdo en que sí ocurre digestión en el lumen intestinal. La presencia de aminoácidos libres en el lumen intestinal6 y en el material fecal7 en garrapatas se ha utilizado para sugerir la presencia de digestión en el lumen intestinal;8 aunque, la fuente de estos aminoácidos puede ser la sangre del hospedero o células digestivas lisadas. Una enzima que pueda funcionar en el lumen intestinal de las garrapatas no ha sido todavía identificada,9 dado que el pH de los contenidos intestinales es 6,3 - 6,510 y lo que sí ha sido demostrado es que la digestión de proteínas ocurre a pH ácido mediante aspártico proteinasas que son inactivas por encima de pH 6,0.11,12En la última década el estudio de las serino proteinasas en artrópodos ha despertado gran interés por constituir mediadores esenciales de ciertos procesos fisiológicos.13 Se ha demostrado que estas proteinasas están involucradas en la digestión del alimento dentro del intestino, en la activación de la cascada de la fenoloxidasa en respuesta a las infecciones microbianas, en la destoxificación de agentes nocivos como los insecticidas y en la modulación del desarrollo embrionario.En el presente reporte se describe el hallazgo de una actividad endopeptidasa neutra de B. microplus por electroforesis en geles de poliacrilamida copolimerizados con gelatina.  MÉ

[学科分类] 传染病学