Preservation of vaccine strains of Leptospira at - 70 掳C

[摘要] Se evaluó la crioconservación a - 70 ºC con 9 variantes de crioprotectores como método de conservación de las cepas de Leptospira interrogans, utilizadas como antígenos en la vacuna antileptospirósica vax-SPIRALâ. La viabilidad se evaluó periódicamente según el rendimiento celular alcanzado por las cepas recién descongeladas en medio EMJH. La estabilidad de la virulencia fue estimada en hámster. La antigenicidad antes y después de la crioconservación fue comparada mediante microaglutinación frente a antisueros de referencia. Solo el empleo de dimetilsulfóxido a 2,5 y 5 % o leche descremada 5 % como agentes crioprotectores permitió una rápida recuperación de las 3 cepas tras 7 meses de crioconservación sin afectación de su virulencia y antigenicidad, mientras el glicerol tuvo un efecto variable sobre el grado de recuperación de las cepas evaluadas. Los resultados obtenidos demuestran la factibilidad de la crioconservación a - 70 ºC con un apropiado agente crioprotector como método de conservación de cepas vacunales de Leptospira.Palabras clave: Leptospira interrogans, cepas vacunales, crioconservación.   La vacuna antileptospirósica trivalente vax-SPIRALâ es una suspensión de células inactivadas de 3 cepas autóctonas de Leptospira interrogans pertenecientes a los serovares Canicola, Copenhageni y Mozdok.1 Dada la reconocida disminución de la antigenicidad con la atenuación de la virulencia de este microorganismo,2 resulta indispensable la disponibilidad de cultivos altamente virulentos para ser utilizados como semillas en el proceso productivo o para los ensayos de potencia de la vacuna en modelos animales. De manera tradicional las cepas vacunales de Leptospira son conservadas en un medio semisólido con suero de conejo como constituyente esencial, que potencialmente garantiza su viabilidad durante pocos meses sin necesidad de frecuentes subcultivos que contribuyen a la disminución de la virulencia. De forma periódica el microorganismo es inoculado y reaislado de animales de laboratorio susceptibles, para emplear el sistema inmune animal como mecanismo de selección de las células muy virulentas y eliminar aquellas con una capacidad patogénica disminuida.3Sin embargo, dada la alta variabilidad nutricional de los diferentes lotes de suero y como consecuencia, la inconsistencia en el crecimiento del microorganismo, el medio de conservación tradicionalmente empleado no garantiza una adecuada estabilidad de la viabilidad de las cepas vacunales. Asimismo, los frecuentes pases por animal requeridos para el mantenimiento de la virulencia resultan en ocasiones inapropiados por razones logísticas, bioéticas o de seguridad del personal. En tal sentido, la introducción de un método de conservación de Leptospira que garantice una duradera y reproducible estabilidad en la viabilidad y virulencia del microorganismo, permitirá incrementar la consistencia entre procesos productivos, disminuir los costos de producción/investigación y minimizar riesgos para el personal.La crioconservación con glicerol o dimetilsulfóxido (DMSO) como agentes crioprotectores, ha ofrecido excelentes resultados en la preservación de la viabilidad y virulencia de este microorganismo y es en la actualidad un método tradicionalmente empleado para la conservación de ceparios al nivel internacional.4-7 El presente trabajo se enmarca dentro de los estudios encaminados a evaluar la crioconservación, como método de conservación de las cepas vacunales de Leptospira incluidas en la vacuna antileptospirósica cubana.Mé

[学科分类] 传染病学