Adaptation of an immunohistochemistry protocol for the detection of Leptospira spp. in samples of formaldehyde-fixed tissue

[摘要] Se evaluó la técnica de inmunohistoquímica en muestras de tejido fijado en solución salina de formaldehído 10 % e incluidas en parafina, para utilizarla como método de laboratorio que permitiera identificar leptospiras en los tejidos. Se utilizaron muestras obtenidas a partir de la inoculación experimental de 8 cobayos con L. interrogans pomona aislada de un caso clínico. Se reprodujo la enfermedad en el modelo de laboratorio. Las secciones histológicas de los riñones de los animales inoculados se sometieron a estudios histopatológicos, inmunofluorescencia, tinción de Warthin-Starry y técnica de inmunohistoquímica con muestras fijadas en formaldehído. La técnica de inmunohistoquímica implementada resultó ser una herramienta eficaz para el diagnóstico de la leptospirosis.Palabras clave: Leptospirosis, diagnóstico, inmunohistoquímica.   La leptospirosis es probablemente la zoonosis de mayor distribución mundial, porque afecta a diferentes especies animales, sobre todo mamíferos, incluido al hombre que puede infectarse accidentalmente.1 Esta enfermedad infectocontagiosa es producida por espiroquetas pertenecientes al género Leptospira. Según la clasificación fenotípica, estas bacterias se agrupan en L. interrogans y L. biflexa.Las cepas patógenas de leptospiras afectan a los animales domésticos y a los silvestres; algunos de estos actúan como hospedadores de mantenimiento o accidentales en función del serovar considerado. Es muy importante el papel que desempeña el hospedador de mantenimiento, porque asegura la perpetuidad del microorganismo en el medio.2 También es importante la presencia de infección renal con leptospiruria prolongada en animales susceptibles que actúan como fuente de infección, porque así puede diseminarse a otros animales y también afectar al hombre.3 El diagnóstico clínico de esta enfermedad, no es tarea fácil, porque los signos no son patognomónicos y la información epidemiológica conduce apenas a la sospecha clínica. Es por esto que se basa principalmente en los exámenes de laboratorio que detectan al agente etiológico, o en aquellos que demuestran la presencia de anticuerpos en el huésped. Para un correcto diagnóstico, es importante conocer la patogenia de la enfermedad y la metodología diagnóstica a utilizar en cada etapa de la infección, como así también tener en cuenta el valor y las limitaciones de las diferentes técnicas diagnósticas. El aislamiento y la tipificación constituyen la verdadera base para el diagnóstico. El primero es difícil porque las condiciones para su crecimiento in vitro son muy exigentes, por lo que un resultado negativo no es indicativo de ausencia de leptospira en la muestra. El aislamiento en cambio no deja lugar a dudas sobre el diagnóstico. En los últimos años se han realizado avances para mejorar los medios de cultivo y la estandarización de los métodos de toma y remisión de muestras al laboratorio; se necesita conocer la dinámica de la infección para poder tomar las muestras adecuadas. Por otro lado, la técnica de aglutinación microscópica (MAT), que evalúa la presencia de anticuerpos séricos contra el agente, es considerada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) como la prueba de oro.4 Entre sus limitaciones se destacan la detección tardía de anticuerpos y la imposibilidad de revelar animales portadores renales o genitales asintomáticos con serología negativa, que todavía pueden eliminar leptospiras por orina, semen o secreciones cérvico-vaginales. En casos de aborto, donde son escasas las posibilidades de aislamiento por causa de la autólisis que presenta el feto, se puede intentar la recuperación del microorganismo de la orina materna o realizar técnicas microscópicas, como inmunofluorescencia directa, o técnicas de biología molecular, para detectar las leptospiras en trozos de órganos. La histopatología de rutina puede aportar mucho al diagnóstico de la enfermedad. La observación de lesiones compatibles refuerza la sospecha clínica de leptospirosis, pero por causa de los frecuentes procesos autolíticos ya mencionados no siempre puede realizarse este tipo de estudio.La técnica de inmunofluorescencia directa permite detectar antígenos bacterianos en muestras de tejido animal y el grado de autólisis de la muestra tiene menor importancia. Así, la técnica permite revelar presencia o ausencia de antígenos, sin importar la presencia o no de lesiones.4 Por su parte la técnica inmunohistoquímica (IHQ) combina elementos inmunológicos, histológicos y bioquímicos que permiten detectar un antígeno y, a diferencia de la inmunofluorescencia, ubicarlo histológicamente en una muestra determinada. Se ha utilizado mucho para el diagnóstico de diversas enfermedades de muy distintas etiologías, así como en estudios de biología celular.5-10 También se ha descrito su aplicación en casos de leptospirosis,11 por lo que sería posible utilizar esta técnica para detectar antígenos de leptospira en muestras de animales donde esta se sospecha.El objetivo del presente trabajo fue implementar un protocolo de inmunohistoquímica para la detección de leptospira, con muestras fijadas en solución salina de formaldehído 10 % e incluidas en parafina según técnicas de rutina para histopatología, en el contexto de un ensayo en el cual se realizaron otros métodos de diagnóstico convencionales. Mé

[学科分类] 传染病学

[关键词] : Leptospirosis;diagnosis;immunohistochemistry