Validation of an ELISA assay for the quantification of antibodies against Haemophilus influenzae type b capsular polysaccharide

[摘要] Se llevó a cabo el estudio de validación de un ensayo tipo ELISA —aceptado internacionalmente para este propósito—, con el objetivo de disponer de un método para la cuantificación de anticuerpos contra el polisacárido capsular de Haemophilus influenzae tipo b (Hib), en los ensayos clínicos previstos para demostrar la inmunogenicidad de una nueva vacuna conjugada, compuesta por un antígeno sintético. La validación fue conducida en el Laboratorio Nacional de Referencia para Haemophilus, en el Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kourí”, La Habana, Cuba, y se diseñó para ello un protocolo en el cual se consideró la determinación de la precisión, exactitud, linealidad y límite de detección del ensayo. En la preparación de la curva patrón estándar se empleó el suero de referencia internacional Hib Lote 1983. Para la repetibilidad y reproducibilidad del sistema se observaron índices de dispersión inferiores a 10 y 20 %, respectivamente. El límite de detección fue de 3,6 ng/m, y los ensayos de recuperación y linealidad revelaron la alta exactitud del método. Se concluyó que durante la evaluación clínica del candidato a vacuna, obtenido por síntesis química, la cuantificación de anticuerpos contra el polisacárido capsular de Hib podía ser afrontada con apropiada precisión y exactitud mediante el método propuesto.Palabras clave: ELISA, Haemophilus influenzae tipo b, precisión, exactitud, linealidad.   El empleo de las primeras vacunas para prevenir las infecciones producidas por Haemophilus influenzae tipo b (Hib) apuntó hacia la necesidad de desarrollar métodos que permitieran estimar la concentración de anticuerpos contra su polisacárido capsular (PS), aplicables a escalas superiores a las utilizadas hasta ese momento.1-6 El método clásico de cuantificación de los anticuerpos anti-PS de Hib es el radioinmunoensayo (RIA), pero su ejecución por parte de los laboratorios que así lo necesiten resulta engorrosa, pues este requiere de la preparación de un antígeno marcado con isótopos radioactivos y necesita de volúmenes mayores de suero para las determinaciones, en comparación con otros métodos.7-9Los sistemas inmunoenzimáticos constituyen una alternativa útil, con mejores posibilidades de extensión y por tanto mayor aplicabilidad. Hasta el presente son varios los ELISAs descritos para la determinación de anticuerpos anti-PS de Hib, pero no existe consenso internacional para definir la superioridad de un método sobre los otros.10El Laboratorio Nacional de Referencia para Haemophilus en el Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kourí” (IPK), como parte del grupo de investigación vinculado a un Proyecto Nacional para la evaluación clínica de un candidato vacunal cubano contra Hib, obtenido por síntesis química, tuvo a su cargo la determinación de la inmunogenicidad de este.11 Para ello, propuso utilizar un diseño de ELISA indirecto, descrito por Phipps y otros en 1990, en el cual los sueros en los que se quiere determinar los anticuerpos anti-PS se añaden sobre placas recubiertas con una preparación antigénica compuesta por una mezcla de fragmentos de varias tallas del oligosacárido de Hib, conjugado con albúmina humana (Ag HbO-HA).12,13 En el presente trabajo se reportaron los resultados de un estudio de validación del ELISA antes mencionado, llevado a cabo con el objetivo de disponer de la herramienta necesaria para la cuantificación de los anticuerpos anti-PS de Hib, durante los ensayos clínicos diseñados para la demostración de la inmunogenicidad del candidato cubano a vacuna. Mé

[学科分类] 传染病学

[关键词] ELISA;tipo b Haemophilus influenzae;accuracy;exactness;linearity