Identificaci贸n de aislamientos de Leptospira por m茅todos serol贸gicos y gen茅ticos

[摘要] Se estudiaron 18 cepas de Leptospira, aisladas de pacientes con leptospirosis humana de 3 provincias de Cuba, empleando métodos serológicos y genéticos. Las cepas fueron agrupadas por aglutinación microscópica (MAT), con 8 antisueros policlonales. Se utilizaron 9 anticuerpos monoclonales (AcMs) para determinar el serovar de las cepas. Alternativamente se realizó la extracción del ADN de estas cepas y fue amplificado por un sistema de reacción en cadena de la polimerasa descrito para leptospiras patógenas. El ADN amplificado fue digerido con las enzimas de restricción Alu I y Hae III. Por MAT las cepas fueron agrupadas entre los serogrupos Ballum, Pomoma, Canicola e Icterohaemorrhagiae. Se determinó el serovar de 7 de las cepas estudiadas con el uso de los AcMs. Para la totalidad de las cepas se obtuvo por reacción en cadena de la polimerasa un fragmento amplificado de 631 pb. El análisis con enzimas de restricción del producto amplificado, originó iguales patrones de restricción en todas las cepas estudiadas. Los métodos utilizados permitieron la identificación a diferentes niveles de todas las cepas estudiadas, se señala que el uso de los AcMs hizo posible tipificar hasta serovar a 7 de las cepas. DeCS: LEPTOSPIRA/aislamiento & purificación; LEPTOSPIRA/crecimiento & desarrollo; TESTS SEROLOGICOS; LEPTOSPIROSIS/diagnóstico; LEPTOSPIROSIS/prevención & control; TESTS DE AGLUTINACION. Entre las actividades que debe realizar un Laboratorio de Referencia de Leptospira está identificar y verificar cepas de Leptospira aisladas de pacientes o ambientales,1 esta identificación puede realizarse con la utilización de varias técnicas y cada laboratorio de referencia puede usar una combinación diferente de pruebas, en dependencia de la disponibilidad de reactivos y la experiencia que tenga con los diferentes métodos. Frecuentemente se usa una combinación de métodos serológicos y genéticos.2 La primera prioridad es determinar si el aislamiento es una leptospira patógena o saprófita. Esto puede hacerse fenotípicamente basado en el crecimiento a 13 ºC, o en presencia de 8-azaguanina ó 5-fluorouracilo, o CuSO4,1 por la reacción en cadena de la polimerasa (PCR, siglas en inglés) con la utilización de cebadores para leptospiras patógenas,3,4 o por inoculación en animales. En Cuba, la existencia de un clima tropical, con regímenes lluviosos en determinadas épocas del año, los diferentes fluviales naturales y artificiales, las extensas áreas agrícolas, han favorecido la propagación de la leptospirosis.5 Teniendo en cuenta la importancia concedida a la identificación de los aislamientos de Leptospira en el perfeccionamiento de los sistemas de diagnóstico, en la Epidemiología, así como en la preparación de vacunas eficaces para el control de esta enfermedad; en el presente estudio los autores se propusieron identificar cepas de Leptospira con la utilización de una combinación de técnicas serológicas y genéticas. Mé

[学科分类] 传染病学