Molecular diagnosis of acute promyelocytic leukemia: preliminary results

[摘要] La leucemia aguda promielocítica (LAP) se caracteriza por la presencia de la translocación recíproca t (15;17) que tiene como resultado la formación del gen híbrido PML-RARa . Como la LAP se considera una emergencia hematológica y además tiene hoy en día un tratamiento muy específico con ácido retinoico (ATRA), es muy importante hacer un diagnóstico rápido y preciso, que en muchos casos permite incluso salvar la vida del paciente. En la actualidad se han desarrollado métodos de RT-PCR para detectar el gen híbrido PML-RARa . Estas técnicas moleculares han sido extremadamente útiles en el diagnóstico de esta entidad. En este trabajo presentamos los resultados preliminares del diagnóstico molecular en 38 pacientes con LAP. En 36 pacientes se demostró la presencia del gen híbrido y 2 fueron negativos. Del total de enfermos con resultados positivos, 19 (55 %) fueron bcr 1, 2 (5 %) fueron bcr 2 y 14 (40 %) fueron bcr 3. Todos los pacientes con resultados positivos respondieron al tratamiento con ATRA. En 1 de los 2 pacientes con resultados negativos se demostró la presencia de la t(11;17). Ninguno de estos 2 enfermos respondió al tratamiento con ATRA. Descriptores DeCS: LEUCEMIA PROMIELOCITICA AGUDA/diagnóstico.   La leucemia aguda promielocítica (LAP), M3 según la clasificación FAB (Grupo Franco-Americano-Británico),1 es uno de los subtipos más comunes de las leucemias mieloides agudas (LMA) y constituyen del 10 al 15 % de los casos en adultos jóvenes.2 Varios estudios recientes han demostrado un aumento relativo en la frecuencia de LAP en algunas poblaciones de Europa, África y América Latina que van desde el 17 al 58 % de las LMA en niños hasta del 22 al 37 % en el adulto.3,4 En la mayoría de los pacientes con esta leucemia se observa la translocación recíproca entre los cromosomas 15 y 17: t(15;17) (q22;q11-21). Como resultado de la t(15;17) en el cromosoma 15 se interrumpe el gen PML, previamente desconocido, y en el cromosoma 17 se interrumpe el gen de la cadena_a del receptor del ácido retinoico (RARa ). El RARa pertenece a la superfamilia de los receptores de hormonas y actúa como un factor de transcripción regulado por el ácido retinoico (AR), mientras que el PML recientemente se ha demostrado que forma parte de un complejo multiproteico llamado cuerpo nuclear (nuclear body). Estos cuerpos nucleares tienen un papel importante en el control del crecimiento celular y se ha sugerido que la desregulación de algunos de sus componentes puede tener importancia en el desarrollo de neoplasias.5 Como resultado de la translocación, se sintetizan las proteínas híbridas PML-RARa y su recíproca RAR aPML. La primera se detecta en todos los casos de LAP, mientras que la segunda sólo en un 70-80 % de estos. Hoy en día se plantea que la proteína híbrida PML-RARa desempeña una función importante en la patogénesis de la LAP porque al provocar la disrupción de los cuerpos nucleares interfiere con el proceso normal de apoptosis. Esto tiene como consecuencia un aumento en la sobrevida de las células y de esta manera promueve el proceso leucemogénico.5 Los estudios citogenéticos iniciales sugirieron que la t(15;17) se encontraba presente en todos los casos morfológicamente diagnosticados como LAP. Hoy en día se sabe que existen casos raros de LAP con otras translocaciones balanceadas que también involucran al RARa . Las translocaciones alternativas asociadas con LAP descritas hasta el momento se resumen al pie de la página. Translocación Oncogenes Respuesta al ATRA t(15;17)(q22;q 21) PML-RAR a Responde t(11;17)(q23;q21) PLZF-RAR a Resistente t(11;17)(q13;q21) NuMA-RARa Responde? t(5;17)(q32;q21) NPM-RAR a Responde? Datos recientes sugieren que las proteínas PLZF y NPM, al igual que la PML, puedan tener actividad supresora de crecimiento y que la NuMA interviene en el proceso de formación del huso mitótico en la división celular. Aunque el número de pacientes con estas translocaciones es hasta el momento muy pequeño, los ensayos de diferenciación y los datos clínicos sugieren que los reordenamientos NPM-RAR a y NuMA-RAR a responden al tratamiento con ATRA como el PML-RARa y contrariamente a lo que sucede con el PLZF-RARa .5Diagnóstico molecular de la LAPEsta enfermedad tiene una serie de características que hacen que se considere una emergencia hematológica y enfatizan la necesidad de un diagnóstico rápido y preciso. En la actualidad está muy claro que la LAP requiere un tratamiento muy específico en comparación con otros tipos de LMA. Esto se debe al riesgo de muerte por hemorragia y al gran riesgo de recaída asociada con una baja supervivencia si estos enfermos no se tratan con ATRA en combinación con quimioterapia. El subgrupo de pacientes con LAP que se benefician del tratamiento con ATRA está definido por la presencia del gen quimérico PML -RAR a . Por lo tanto, establecer la presencia del reordenamiento PML -RAR a en pacientes en los que se sospeche una LAP, es crítico para el manejo óptimo del paciente.5,6 En la mayoría de los pacientes la presencia indirecta del PML-RARa está indicada por la detección de la t(15;17). Sin embargo, en la actualidad se sabe que en algunos pacientes en los cuales se detecta por técnicas moleculares el gen PML-RARa , no se observa la trans-locación por técnicas citogenéticas. Esto puede deberse a fallos en la técnica citogenética, a inserciones submicroscópicas en las cuales los cromosomas 15 y 17 tienen citogenéticamente una apariencia normal, o a aberraciones cromosómicas complejas que involucran varios cromosomas. Según los datos más recientes, en el 15 % de los pacientes con LAP no se detecta la t(15;17) por los métodos citogenéticos convencionales, de los cuales el 9 % representa fallos citogenéticos, el 4 % eventos de inserciones y el 2 % es debido a aberraciones cromosómicas complejas. Sin embargo, diversos ensayos clínicos demostraron que los pacientes con el reordenamiento PML-RAR-a y resultados citogenéticos normales, reaccionan favorablemente con el mismo tratamiento que aquellos con la t(15;17) clásica.5 Varios grupos de investigadores han desarrollado métodos de RT-PCR (reverso transcripción y reacción en cadena de la polimerasa) para detectar el gen híbrido PML-RARa . Estas técnicas moleculares han sido extremadamente útiles en el diagnóstico rápido de esta entidad y también en la detección de la enfermedad mínima residual (EMR) durante el tratamiento y seguimiento de estos pacientes.6-10 Los estudios moleculares han demostrado que existen 3 puntos de ruptura dentro del gen PML: el bcr 1 (situado en el intron 6) cuya frecuencia es de aproximadamente 60 %, el bcr 3 (situado en el intron 3) cuya frecuencia aproximada es de 33 % y el bcr 2 (situado en posiciones variables del exon 6) que constituye el resto de los casos. El punto de ruptura en el RARa es siempre el mismo.5 Por todo lo anteriormente expuesto, es indudable que es muy importante realizar un diagnóstico rápido y preciso de esta entidad, por lo que el objetivo de nuestro trabajo fue estandarizar el diagnóstico molecular de la LAP en nuestro laboratorio. A continuación presentamos los resultados del estudio inicial de nuestros pacientes con LAP.MÉ

[学科分类] 生理学与病理学